高效液相色谱-质谱联用测定大鼠不同脑区的游离型神经甾体

目的建立大鼠不同脑区3种游离型神经甾体的测定方法。方法甾体分两步萃取，首先用乙酸乙酯-正己烷(90∶10)提取甾体，然后经固相萃取纯化。游离型甾体进行衍生化后应用高效液相色谱-质谱分离测定，选择甲基睾丸酮作为内标。结果去氢表雄酮的线性范围为0.030-2.00μg·l-1，孕烯醇酮和别孕烯醇酮的线性范围为0.025-2.00μg·l-1。正常雄性sprague-dawley(sd)大鼠不同脑区甾体去氢表雄酮(dhea)，孕烯醇酮(preg)和别孕烯醇酮(ap)的含量分别为额叶皮质(0.70±0.23)，(4.8±1.9)，(1.1±0.6)ng·g-1，海马(0.57±0.28)，(6±3)，(0.5±0.3)ng·g-1，杏仁核(1.5±1.0)，(9±5)，(1.4±0.9)ng·g-1，纹状体(0.52±0.14)，(7.7±2.8)，(0.5±0.6)ng·g-1，伏隔核(2.9±1.6)，(18±9)，(1.6±1.3)ng·g-1，垂体(4.0±2.0)，(27±12)，(0.8±0.5)ng·g-1，下丘脑(1.7±1.2)，(16±10)，(0.8±0.7)ng·g-1。结论3种神经甾体都有良好的线性关系和准确度，本方法可满足大鼠不同脑区内游离型甾体的分离测定。