脱氧萎镰菌醇通过下调grp78提高双链转fviii基因细胞分泌重链和生物活性

双链转凝血viii因子(fviii)基因是克服aav载体容量限制的有效方法,但重链分泌的低效性带来链不均衡性。本文旨在用脱氧萎镰菌醇(deoxynivalenol,don)降解内质网分子伴侣蛋白grp78,通过减少重链与grp78的结合提高重链分泌,改善双链转fviii基因的功效。用don处理双链共转基因细胞,观察了双链转fviii基因293细胞分泌的重链和fviii活性。结果显示,用500ng·ml？1don处理细胞3h后,grp78蛋白水平明显降低,细胞的生长不受明显影响;单独转fviii重链基因的don处理细胞分泌的重链量[(59±11)ng·ml？1]明显高于对照细胞[(15±4)ng·ml？1],双链共转基因时重链的分泌量进一步增加,为(146±34)ng·ml？1,活性达到(0.66±0.15)u·ml？1,明显高于双链转基因对照细胞[分别为(76±17)ng·ml？1和(0.35±0.09)u·ml？1]。结果表明,don可通过下调grp78改善重链的分泌性,提高双链转fviii基因的功效,为进一步动物体内双aav载体转fviii基因提供了实验依据。