重组复制型溶瘤腺病毒p53的质量控制方法

建立重组复制型溶瘤腺病毒p53(sg600-p53)的质控检测方法与质量标准。采用限制性内切酶酶切、pcr法对端粒酶启动子、低压缺氧调控元件融合的巨细胞病毒(cytomegalovirus,cmv)启动子、p53基因等重组病毒载体结构进行分析,鉴定结果均与理论值相符。经紫外吸收法(a260)检测,病毒颗粒数为2.0×1011vp·ml？1;tcid50法测定感染活性为5.0×1010iu·ml？1。p53蛋白elisa检测结果表明,重组病毒体外感染人肺癌细胞h1299后,感染组核蛋白和空白对照组a450吸收度之比为5.2。该基因治疗制剂对人肺癌细胞a549体外杀伤的moiic50为1.0。以相同moi感染并经tcid50法检测,重组病毒在人肺癌细胞a549与人表皮成纤维二倍体细胞bj的增殖比值为398。经阴离子高效液相色谱分析,病毒载体颗粒纯度为99.5%。定量pcr检测表明在1×107vp的病毒颗粒中,野生型腺病毒基因片段少于1个拷贝。本研究建立的重组复制型溶瘤腺病毒的质量标准与检测方法,可用于该制品的质量控制,同时也为其他溶瘤基因治疗病毒载体质控研究提供参考。