金丝桃素合酶基因的快速克隆及功能鉴定

金丝桃素合酶能催化大黄素生成金丝桃素,根据已发表的金丝桃素合酶的基因序列,设计了6对引物,通过连续重叠pcr快速克隆得到了金丝桃素合酶基因hyp-1。构建含hyp-1基因的原核表达载体pet32ahyp,将该载体导入大肠杆菌进行诱导表达。sds-page结果表明,hyp-1基因在大肠杆菌中获得表达;westernblot结果表明,重组的hyp-1蛋白具有特异的免疫活性,表明hyp-1基因在e.coli中得到了表达。酶促反应表明,hyp-1确实能催化大黄素形成金丝桃素,上述结果表明,本研究克隆的hyp-1基因是金丝桃素合酶基因,具备催化大黄素形成金丝桃素的能力,从而为通过合成生物学技术制备金丝桃素奠定了物质基础。