cys突变体凝血viii因子的蛋白质反式剪接

为改善蛋白质反式剪接效率,将b-区缺失型fviii(bdd-fviii)重链的tyr664和轻链的thr1826突变为cys,双载体共转cos-7细胞,观察了细胞内蛋白质剪接、二硫键形成和细胞培养上清液中分泌的剪接bdd-fviii量和活性。westernblotting检测结果显示,cys突变可在细胞内形成链间二硫键,剪接bdd-fviii蛋白量明显增加;双夹心elisa检测分泌的剪接bdd-fviii为(128±24)ng·ml？1,明显高于对照(89±15)ng·ml？1;coatest法检测结果显示,细胞分泌的凝血活性为(0.94±0.08)u·ml？1,也明显高于对照(0.62±0.15)u·ml？1。结果表明,链间二硫键形成可显著提高基于蛋白质剪接的双载体转bdd-fviii基因作用,为进一步动物体内实验提供了依据。