重组腺相关病毒2型/人凝血因子ix的质量研究重组腺相关病毒2型/人凝血因子ix的质量研究

目的研究并建立重组腺相关病毒2型/人凝血因子ix(recombinantadeno-associatedvirustype2/humanbloodcoagulationfactorix,raav-2/hfix)的质量标准。方法采用pcr法确认病毒所携带的重组核酸结构和测定辅助病毒(helpervirus)和野生型腺相关病毒（wtaav）的残留片段。sds-page电泳测定病毒外壳蛋白分子量及纯度，tskgelsp-npr阳离子交换柱系统测定病毒颗粒纯度。以斑点杂交法测定病毒颗粒数。一期法于ix因子基因剔除小鼠体内测定raav-2/hfix生物学活性，并通过elisa法测定感染bhk-21细胞后hfix的表达量。结果pcr法确证病毒的重组核酸结构与构建预期相同；在1×107vg的raav-2/hfix颗粒中，残留辅助病毒的基因片段数少于1个拷贝；在1×108vg的raav-2/hfix颗粒中，野生型aav-2基因片段数少于1个拷贝。病毒颗粒及外壳蛋白纯度均大于98%，病毒颗粒数大于1.0×1015vg·l-1(virusgenome·l-1)。ix因子剔除小鼠肌肉注射病毒后21d，小鼠血液中人凝血因子ix活性达到大于正常人因子ix活性的15%，ix因子的体外表达水平大于20.0μg·l-1。其他各项检测指标均符合规定。结论建立了raav-2/hfix的质量标准，用于控制产品质量。