建立体外共培养血脑屏障模型评价纳米粒的胞吞转运和毒性

目的建立大鼠脑毛细血管内皮细胞(bcecs)和星形胶质细胞共培养模型，评价纳米粒的跨血脑屏障(bbb)转运和对内皮细胞紧密连接的毒性。方法采用复乳/溶媒蒸发法制备载荧光探针6-香豆素的聚乙二醇-聚乳酸纳米粒。首先，分别从新生鼠大脑分离培养bcecs和星形胶质细胞并进行免疫组化鉴定。然后，将bcecs接种于细胞培养池微孔膜的上面，将星形胶质细胞接种于膜下面建立共培养模型。分别测定14c-蔗糖和纳米粒的渗透系数。结果载6-香豆素纳米粒的平均重均粒径为(102.4±6.8)nm，zeta电位为(-16.81±1.05)mv。bcecs的viii因子表达呈阳性；星形胶质细胞的胶质原纤维酸性蛋白表达呈阳性。模型的跨内皮细胞电阻值为(313±23)ω·cm2。扫描电镜和透射电镜观察发现，共培养模型中的bcecs形成紧密连接。纳米粒的质量浓度低于200μg·ml-1时，不影响14c-蔗糖渗透系数的改变，表明其不会影响bbb内皮细胞的紧密连接。10μg·ml-1载6-香豆素纳米粒的渗透系数为0.29×10-3cm·min-1。结论该大鼠bbb模型与体内情况接近，适合用于评价纳米粒的脑内转运和毒性。