基于报告基因的雌激素受体β亚型激动剂细胞筛选模型的建立

目的建立基于报告基因和雌激素受体β(estrogenreceptorβ，erβ)亚型信号通路的药物筛选模型，以期发现erβ亚型激动剂。方法构建带有雌激素应答序列(estrogenresponsiveelement，ere)靶序列和报告基因的诱导性表达载体ptal-ere-seap，并将其转入人胚肾(hek293)细胞中，筛选报告基因分泌型碱性磷酸酶(secretedalkalinephosphatase，seap)表达受雌二醇(17β-estradiol，e2)诱导的阳性克隆。选取相关核受体配体进行模型的特异性考察，同时考察模型的稳定性及时效量效关系，以及免疫细胞化学染色鉴定转染后erβ的表达情况。利用此模型对本实验室样品库中的2622个化合物进行筛选。结果转染ptal-ere-seap的hek293细胞中，seap报告基因的表达受e2的诱导并呈剂量与时间依赖关系，e2对阳性克隆细胞无增殖作用，本模型的z′因子值为0.7，免疫细胞化学染色结果表明，转染后erβ表达、地塞米松以及其他配体的诱导表达率低。结论利用此模型通过测定seap报告基因的诱导表达水平可筛选erβ亚型激动剂。