重组sars-cov未知功能小蛋白x5表达、纯化及抗体制备

将sars-cov未知功能小蛋白x5的基因在大肠杆菌中进行诱导表达，获得以包涵体形式存在的重组x5蛋白。通过高浓度尿素变性溶解包涵体，亲和层析法纯化蛋白，然后对其进行尿素梯度透析复性，最终得到的蛋白纯度>95%，终产率93.3mg·l-1。sds-page电泳和lc-esi-ms/ms结果表明，该重组蛋白大小与理论相符，序列与genbank中注册的x5蛋白序列一致，说明该蛋白为目的蛋白。利用纯化的x5蛋白制备得到多克隆抗体，elisa检测抗体效价为1∶72900，说明纯化后的蛋白对兔有很强的免疫原性。x5多克隆抗体的成功制备，为将来鉴定x5蛋白的药理学活性奠定了基础。