甲型h1n1流感病毒非结构蛋白ns1与人cpsf30结合拮抗剂筛选模型的建立及药物筛选

利用酵母双杂交技术研究甲型h1n1流感病毒非结构蛋白ns1和人切割与多聚腺苷酸化特异因子30kda亚基(cpsf30)的相互作用,构建了一个酵母模型用于筛选ns1和cpsf30相互作用的拮抗剂,从而为筛选抗甲型h1n1流感病毒药物奠定基础。采用连续重叠pcr技术克隆得到h1n1流感病毒ns1基因。提取人hela细胞rna,通过rt-pcr克隆得到人cpsf30基因。将ns1基因克隆到表达载体pgbkt7中获得诱饵载体pgbkns1,将cpsf30基因克隆到载体pgadt7中获得捕获载体pgadcpsf;将pgbkns1和pgadcpsf共转入酿酒酵母ah109,获得重组酿酒酵母ah109[pgadcpsf+pgbkns1]。利用该模型筛选了30余种中成药,发现双黄连口服液等4种中成药能抑制ns1和cpsf30之间的相互作用。