聚乙烯亚胺-胆固醇结合脂质微泡介导的基因转染系统

本文研究了聚乙烯亚胺-胆固醇阳离子聚合物(pei-chol)基因载体的性能及其结合中性脂质、聚乙二醇修饰脂质微泡介导的基因传递系统(微泡/pei-chol/dna)的体外细胞基因转染效率。采用胆固醇甲酰氯与聚乙烯亚胺(mw1800)通过酰胺化制得pei-chol,并运用ir、1hnmr和madi-tof-ms(基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱)对其结构和分子量进行测定,平均相对分子质量约为2000。采用反相挥发法制备dppc、dspe-peg2000和全氟丙烷构建的粒径为2～8μm的脂质微泡,并运用自组装技术将pei-chol/dna复合物与微泡融合,构建微泡/pei-chol/dna(bubble/pei-chol/dna)基因转染系统;以pegfp-cl(enhancedgreenfluorescentprotein,增强型绿色荧光蛋白)为报告基因,用凝胶滞留试验考察pei-chol的dna压缩能力,同时在a549和mcf-7两种细胞中比较以pei-chol为核心构建的各种载体系统的细胞毒性、抗血清沉淀作用以及细胞转染效率。结果发现,当n/p比值为4以上时,pei-chol能有效压缩dna;pei-chol和构建的微泡系统对a549和mcf-7两种细胞几乎没有毒性;本微泡介导基因转染系统,一方面降低pei-chol的毒性,提高抗血清蛋白沉淀作用,另一方面提高其基因转染效果。研究表明新型bubble/pei-chol/dna是一种高效低毒的非病毒基因载体系统。