vwf促进intein剪接的bdd-fviii的分泌和活性

vwf是由巨核细胞和血管内皮细胞合成的糖蛋白,其主要功能之一为凝血viii因子(fviii)的载体,防止后者被血浆酶降解。作者最近的工作证明intein可应用于双载体转移b结构域缺失型fviii(bdd-fviii)基因,通过翻译后的蛋白质反式剪接形成完整的功能性bdd-fviii蛋白。为了研究vwf对于intein连接的bdd-fviii分泌和活性的影响,通过intein融合的bdd-fviii重、轻链基因和vwf基因共转染培养的293细胞,采用elisa观察了分泌至培养上清液中的由intein剪接的全长bdd-fviii抗原量,并用coatest检测了由其产？生的活性。结果显示,vwf基因共转染细胞上清液中,全长bdd-fviii抗原量为(235±21)ng·ml？1,活性为(1.98±0.2)u·ml？1,明显高于未转染vwf的细胞[(110±18)ng·ml？1和(1.10±0.15)u·ml？1],也明显高于单独转染bdd-fviii基因的对照细胞[(131±25)ng·ml？1和(1.22±0.18)u·ml？1],表明vwf基因共转染可显著改善双载体转bdd-fviii基因后intein剪接的bdd-fviii蛋白的分泌和生物活性。为基于蛋白质剪接的断裂bdd-fviii基因转移的甲型血友病基因治疗研究中,应用vwf基因共转移以提高治疗的功效提供了依据。