金钱白花蛇快速pcr鉴别方法的建立

本文旨在建立一种快速、高效的鉴别金钱白花蛇药材及其伪品的pcr方法。通过对金钱白花蛇及其伪品的cytb序列进行序列比对分析,设计1对能准确鉴别正品金钱白花蛇和其伪品的引物。采用商品化基因组dna提取试剂盒提取基因组总dna,采用两步循环pcr程序进行pcr鉴别,并对影响pcr结果的主要因素(退火温度、taq酶用量、循环次数等)进行方法学考察和优化,对不同公司pcr仪、taq酶产品进行普适性试验。在方法学考察的基础上,以试剂盒提取药材正品13批、伪品20批,反应参数:95℃预变性5min,循环反应30次(95℃30s,55℃45s),72℃延伸5min的条件可使所有受检样品得到准确鉴定,鉴别过程可在4h内完成,适合于金钱白花蛇pcr鉴别方法的推广应用。