淫羊藿次苷ⅱ促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨性分化过程中inos活性和no生成量的变化

研究淫羊藿次苷ii(icarisideii,icsii)对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(ratbonemarrowstromalcells,rbmscs)成骨性分化过程中诱导性一氧化氮合酶(inducednitricoxidesynthase,inos)表达及no生成的影响。贴壁筛选法体外培养rbmscs,待铺满80%皿底时,进行成骨性诱导培养,同时采用1×10？5mol·l？1icsii进行药物干预,比较icsii组、l-name组、icsii+l-name组和不加药的对照组之间的inos的活性、no生成量,对比各组之间的成骨性指标,包括碱性磷酸酶活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(cfu-falp)及钙化结节数量。提取总rna,实时荧光定量rcr(real-timepcr)检测osterix(osx)、runx-2及inosmrna的表达情况;同时提取总蛋白,westernblotting法检测ⅰ型胶原蛋白和inos的分泌量。icsii可显著增强碱性磷酸酶(alp)活性,增加钙化结节和cfu-falp数量,与成骨性分化相关的因子osx和runx-2的基因表达量也显著升高,同时？i型胶原的分泌量也明显增多,但这些效应均可被inos的特异性抑制剂l-name所抑制。icsii可显著促进rbmscs的成骨性分化,但采用l-name进行阻断后,随着inos和no表达的降低,成骨性分化的指标随之降低,提示icsii是通过提高inos活性,促进no的生成来刺激rbmscs的成骨性分化的。