沙蟾毒精抑制血管生成的作用

探讨沙蟾毒精(arenobufagin)对体内外血管生成的抑制作用。采用mtt法检测沙蟾毒精对人鼻咽癌细胞(cne-2)、人喉癌细胞(hep2)、人神经母细胞瘤(sh-sy5y)、人结肠癌细胞(lovo)、人前列腺癌细胞(pc-3及du145)和人脐静脉内皮细胞(huvecs)的细胞毒性及运用光学显微镜观察细胞形态的变化,发现沙蟾毒精剂量依赖性抑制cne-2、hep2、sh-sy5y、lovo、pc-3、du145和huvecs增殖,且在对人癌细胞亚细胞毒浓度下能够有效抑制huvecs的增殖。采用鸡胚尿囊膜(chickembryochorioallantoicmembrane,cam)模型观察新生血管的生成,结果发现沙蟾毒精作用24h后,尿囊膜新生血管生成明显减少。采用细胞周期分析法观察到沙蟾毒精阻滞huvecs于g2/m期,且随着浓度增加,细胞出现sub-g1凋亡峰。运用流式细胞术检测沙蟾毒精作用huvecs后的凋亡现象以及线粒体膜电位的变化,确证沙蟾毒精呈时间和剂量依赖性诱导huvecs凋亡,同时检测到线粒体膜电位下降。westernblotting检测发现,沙蟾毒精作用huvecs后,凋亡标志分子parp被切割。上述研究表明,沙蟾毒精具有明显的体内外抑制血管生成作用,其抑制作用可能与诱导血管内皮细胞周期阻滞及凋亡有关。