亲水突变法提高抗vegfr2单链抗体的体外亲和力

为了提高抗vegfr2单链抗体ak404r的亲和力,本研究采用亲水突变法将ak404r的重链cdr3区进行突变,建立次级突变单链抗体库。利用噬菌体展示技术从次级突变库中筛选具有抗vegfr2特异性、高亲和力抗体,获得的抗体突变株经大肠杆菌hb2151分泌表达,镍亲和色谱柱纯化,并采用竞争性elisa法、生物信息学方法分别对其亲和力和结构进行了分析。本研究最终建立了6.4×105的次级突变单链抗体库,其中两株突变株的亲和力有明显提高,两株突变株经分离纯化得到电泳纯的蛋白,竞争性elisa结果显示突变体wz01和wz02的亲和力比亲本提高了3倍;生物信息学方法分析突变体与抗原的作用面增大、契合紧密,这可能是亲和力提高的原因之一。研究结果表明,在重链cdr3区引入亲水性氨基酸构建抗体突变库,可有效提高scfv的亲和力。