抗egfr/抗kdr双特异性单链抗体的构建及表达

针对egfr或vegfr信号通路的相互作用导致的耐药性,为增强抗egfr或抗vegfr2抗体单独使用疗效不佳的癌症的治疗效果,本文利用重叠pcr将抗人egfr胞外区单链抗体基因scfv-e10和抗人vegfr2(kdr)的单链抗体基因scfv-ak404r融合在一起,得到抗egfr/抗kdr双特异性单链抗体(bispecificsingle-chaindiabody,scdb)基因,scdb的连接肽序列为15个氨基酸(g4s)3,在肽链的c端引入his标签及myc标签。将scdb基因连接入载体phen2,转化大肠杆菌hb2151并诱导表达,经镍柱纯化获得电泳纯scdb蛋白,产量约为570μg·l？1发酵液。elisa测定显示,scdb与egfr胞外区的结合与亲本scfv-e10相当,与kdr胞外区的结合略低于亲本scfv-ak404r,表明抗egfr/抗kdrscdb可与egfr和kdr两种抗原特异性结合,可用于进一步的抗肿瘤活性研究。