利用基因转化提高虎杖毛状根中活性成分的含量

通过转白藜芦醇合酶(resveratrolsynthase，rs)基因提高虎杖毛状根中主要活性成分——白藜芦醇(resveratrol，re)和白藜芦醇苷(polydatin，pd)的含量。用改进的高盐低ph法提取葡萄基因组dna，通过pcr扩增获得rs基因序列，构建表达载体pcambia1300-35s-rs，然后采用冻融法转化发根农杆菌atcc11325，继而浸染划伤的虎杖无菌幼苗叶片，pcr和rt-pcr法鉴定rs基因在虎杖毛状根中的整合与表达，高效液相色谱(highlyeffectiveliquidchromatography，hplc)法测定转基因毛状根中re及pd的含量。首次成功诱导获得转rs基因虎杖毛状根，经鉴定该基因已在虎杖毛状根中得到整合与表达，re和pd的含量分别为17～187μg·g-1dw和836～1970μg·g-1dw，而未转基因虎杖毛状根中re和pd的含量分别为0～130μg·g-1dw和190～320μg·g-1dw。在所选取的不同根系中，转基因毛状根pd的含量均得到显著提高，最高含量是未转基因毛状根的5倍，而re含量提高不显著。