内源性胱硫脒-γ-裂解酶/硫化氢调控hepg2细胞凋亡

探讨内源性胱硫脒-γ-裂解酶/硫化氢(cse/h2s)对人肝癌hepg2细胞凋亡的调控作用。采用mtt法和台盼蓝染色法检测细胞增殖;亚甲基蓝法检测细胞内源性h2s的产生;pi/hoechst双染法检测细胞凋亡;荧光探针法检测细胞内超氧阴离子及ros水平;oxiselect？totalglutathioneassay试剂盒检测细胞内还原型谷胱甘肽(gsh)水平;westernblotting检测activated-caspase3、p-akt和nrf2表达。结果显示,cse抑制剂dl-炔丙基甘氨酸(pag)和csesirna可明显降低细胞内h2s水平,可呈剂量和时间依赖性地抑制hepg2细胞增殖。pag和csesirna均可明显增加hepg2细胞凋亡率以及细胞内超氧阴离子和ros的水平,降低细胞内gsh水平。csesirna引起的ros水平升高及gsh水平降低可被重组质粒pcdna3.1/myc-his(？)-cse恢复。csesirna可促进caspase3的活化,但不会影响p-akt及nrf2蛋白的表达。结果表明,内源性cse/h2s系统可通过氧化应激调控hepg2细胞的增殖及凋亡。