海洋富油微拟球藻nannochloropsisgaditanaccap849/5的转化及外源基因整合方式

？微拟球藻nannochloropsis被认为是具有作为生物柴油原料开发潜力的微藻。为了能够实现工业化生产,有效地利用基因工程或遗传操作手段改造微藻,提高产量,建立稳定有效的遗传转移方法十分必要。本研究以微拟球藻本源β-tublin基因启动子和三角褐指藻phaeodactylumtricornutmfcpa终止子驱动和终止来源于细菌的shble抗性选择基因,构建了一个转化载体phb4857。将phb4857以电转移的方法转化海洋富油微拟球藻nannochloropsisgaditanaccap849/5。结果显示,转化子可以在3μg·ml-1zeocin的抗性培养基中生长,pcr检测shble基因为100%插入率,转化效率为1.25×10-6。dna印迹杂交结果表明,外源基因是以随机整合的方式一个或多个拷贝插入到宿主核基因组中的,大多数转化子中的外源基因的整合是完整的。转化子在抗性培养基中每10天传一代,连续传代7个月以上,未检测到抗性基因丢失现象,外源抗性基因可以在宿主细胞中稳定存在。