黄斑篮子鱼去毒相关基因的克隆与肝脏组成型表达分析

？从基因水平探讨海洋鱼类对海洋藻毒素的去毒分子机理。采用rt-pcr法成功克隆了黄斑篮子鱼siganusoramin肝脏i时相代谢酶细胞色素p4501a(cyp1a)、ii时相代谢酶alpha型谷胱甘肽s-转移酶(gsta)和rho型谷胱甘肽s-转移酶(gstr)、热休克蛋白70(hsp70)、alpha1型钠钾atp酶(atp1a1)及β-肌动蛋白(beta-actin,act)基因cdna核心序列，序列分别长879bp、582bp、588bp、660bp、749bp和554bp。序列同源性分析发现，属鲈形目的黄斑篮子鱼cyp1a、gsta和gstr与同属鲈形目的牙鲆paralichthysolivaceus、欧洲鲽pleuronectesplatessa、真鲷pagrusmajor、鲤形目的斑马鱼brachydaniorerio相应氨基酸序列同源性较高，cyp1a和gsta与非洲爪蟾(两栖类)、鸡(鸟类)、小鼠、大鼠和人(哺乳类)相应氨基酸序列同源性低，这可能与鱼类i、ii时相去毒酶基因承担水环境毒素去毒代谢的特殊功能有关；而hsp70、atp1a和β-肌动蛋白在鱼类、两栖类、鸟类、哺乳类中均有较高的同源性，这可能与这些基因在机体中承担的最基本的生命功能相关。应用半定量rt-pcr的方法，以β-肌动蛋白作为外参照，在指数期增长范围内分别得到了cyp1a、gsta、gstr、hsp70和atp1a1mrna与β-肌动蛋白mrna(%)的比值，确定黄斑篮子鱼肝脏去毒相关基因的组成型表达水平。其中，黄斑篮子鱼肝脏cyp1a、gsta和gstr基因组成型表达相对较高，hsp70和atp1a1基因组成型表达相对较低，这可能与不同基因在黄斑篮子鱼海洋藻毒素去毒分子机理中承担的作用相关，为海洋藻毒素在海洋鱼类中的积聚及代谢去毒分子机制的研究提供了相关数据。