斜带石斑鱼胰蛋白酶原和淀粉酶全长cdna的克隆与序列分析

？？采用rt-pcr及race法从斜带石斑鱼epinepheluscoioides肝胰脏克隆得到胰蛋白酶原(trypsinogen,try)与淀粉酶(amylase,amy)基因cdna全序列。斜带石斑鱼肝胰脏try基因cdna全长911bp,其中5’非翻译区(5’-utr)为55bp,3’-utr为127bp,开放阅读框(orf)为729bp,编码242个氨基酸,包含所有丝氨酸蛋白酶中共有的高度保守的催化活性中心。序列一致性分析发现,斜带石斑鱼与牙鲆paralichthysolivaceus、金头鲷sparusaurata、鳎soleasenegalensis、石鲽pleuronectesbicoloratus的try序列相似性高达86.8%—89.7%,与人homosapiens、小鼠musmusculus、斑马鱼daniorerio的try相似性较低为59.9%—64.5%。斜带石斑鱼amy基因cdna全长1657bp,其中5’-utr为41bp,3’-utr为77bp,orf为1539bp,编码512个氨基酸,包含与哺乳动物α-amy二级结构相似的8个α螺旋和8个β折叠。序列一致性分析发现,斜带石斑鱼与澳洲肺鱼neoceratodusforsteri、美洲拟鲽limandaamericanus、大西洋鲑salmosalar、斑马鱼amy基因序列相似性高达82.4%—91.8%,与人、小鼠、鸡g.gallus的amy基因相似性较低为70.1%—72.3%。斜带石斑鱼try和amy基因cdna全序列的成功克隆为进一步研究其表达调控机理及研发有效提高其表达水平的饲料添加剂奠定基础。