土壤微生物rapd分析体系的优化研究

？采用正交实验设计,对影响土壤微生物rapd扩增体系的mg2+、dntp浓度及引物浓度进行了研究,同时对退火温度、延伸时间及循环次数进行摸索。结果表明,适宜土壤微生物pcr扩增反应在25μl体积中进行,包括7ng土壤微生物dna样品、20pm随机引物、1.5utaq酶、3.0mmol.l-1mg-cl2和0.2mmol·l-1dntp。pcr扩增反应进程如下:94℃3min,使土壤dna变性;然后再进行39个循环,每个循环包括94℃1min,37℃40s,72℃90s,结束后72℃延伸7min。