双bt基因提高青花菜对菜粉蝶和小菜蛾抗性

？以青花菜（brassicaoleraceal.ssp.italica）下胚轴为外植体，通过农杆菌介导的遗传转化方法将苏云金芽胞杆菌（bacillusthuringiensis）晶体毒蛋白基因cry1ac和cry1c分别导入青花菜栽培品种绿彗星中，各获得35株卡那霉素抗性植株。分别以cry1ac和cry1c特异引物对转基因植株进行pcr扩增，结果得到27株cry1ac阳性植株和13株cry1c阳性植株。以目的基因cry1ac和cry1c为探针，进行southernblot分析，证明多数植株目的基因已经整合到青花菜基因组中。对含有单拷贝目的基因植株自交纯合后通过有性杂交获得带有cry1ac和cry1c双价的转基因青花菜。利用rt-pcr检测bt基因在转基因植株中的表达情况，发现不同株系间在rna水平上存在显著的表达差异，部分株系中双价bt同时得到表达。elisa检测转基因植株bt毒蛋白含量为0.12~0.82μg/gfw。结合室内和田间饲虫试验，证明抗虫效果与bt毒蛋白表达水平正相关。通过多世代选择，获得高抗菜粉蝶（pierisrapael.）和小菜蛾（plutellaxylostellal.）的纯合转基因青花菜材料。双价抗虫基因共同作用，提高了青花菜的抗虫性。