多粘类芽孢杆菌菌株m-1启动子片段的克隆及绿色荧光蛋白的表达

？摘要应用启动子探针载体pece7，从多粘类芽胞杆菌(panebacilluspolymyxa)菌株m-1基因组克隆到一系列启动子活性片段，通过氯霉素（chloramphenicolchloromycetin，cm）浓度梯度筛选出cm抗性较强的3个片段。将这3个具有启动子活性的片段与来自gfp表达载体pgfp78的gfpmut3a基因插入escherichiacoli-bacillus穿梭载体phy300ply中，获得gfp表达载体pgfp5，pgfp8和pgfp17。通过热激转化e.colidh5α，荧光显微镜下观察到明亮的绿色荧光，表明筛选到的启动子片段具有良好的启动外源基因gfp转录的功能。同时利用此表达载体标记本实验筛选得到的生防蜡样芽胞杆菌（bacilluscereus）菌株b905，获得了gfp标记的工程菌bacilluscereusb905（gfp-5、gfp-8和gfp-17），通过荧光显微镜观察，发现转入gfp表达载体pgfp5和pgfp8后，菌体有明亮的绿色荧光，而转入pgfp17的菌体荧光相对较弱。