胚盘下腔注射法将外源质粒pegfp-n1导入鸡胚的研究

？摘要研究运用胚盘下腔注射法将外源质粒pegfp-n1导入鸡胚，通过检测外源基因表达载体在鸡胚发育过程中的动态代谢、与宿主基因组整合情况，进而对该模式在制备转基因鸡和基因功能研究中的可能性进行探讨。取新鲜鸡胚为实验材料，胚盘下腔注射pegfp-n1，石蜡膜封口后孵化，于不同时间段采集鸡胚及出雏鸡组织样，pcr方法检测pegfp-n1的分布及其降解情况。同时，对酶切、回收后的阳性样本基因组用pcr检测了外源质粒与基因组dna的整合情况。研究结果表明：实验组0.5、1、3、4、5和6日龄鸡胚以及初生雏鸡中均可检测到外源质粒pegfp-n1上的egfp基因，阳性率分别为100%、80.00%、66.57%、75.00%、64.29%和84.21%。随着鸡胚的发育，外源质粒会被逐渐代谢掉，出雏时实验组雏鸡的阳性率为75％。但是，阳性样本基因组经hindⅲ酶切后pcr检测结果表明，pegfp-n1未与宿主染色体产生整合，而是以游离或者多聚状态存在于鸡胚组织中。