嗜水气单胞菌丝氨酸羟甲基转移酶基因的克隆及酶学分析

？摘要以嗜水气单胞菌(aeromonashydrophila)基因组dna为模板，通过pcr方法首次克隆了该菌的丝氨酸羟甲基转移酶基因(glya)。将该基因插入到表达载体pgex-6p-1中，转化大肠杆菌(escherichiacoli)dh5α，获得含有重组质粒pgex-glya的重组菌株。核苷酸序列测定表明该基因(genbank登录号：fj797607)全长1254bp，编码417个氨基酸。重组菌株iptg诱导表达后，经过gst-tag亲和层析纯化，得到约45kd的目的蛋白。对纯化的丝氨酸羟甲基转移酶进行酶学性质分析表明，该酶的最适反应为ph8.0，最适反应温度为20℃，cu2+和mn2+对该酶有激活作用，而zn2+和sds对该酶有抑制作用。由于该酶的最适反应温度是20℃，使得它在工业上具有一定的应用价值，同时有助于对低温酶机制的研究。