celⅰ酶的粗纯化及活性分析

？tilling（targeting-inducedlocallesionsingenomes）技术作为反向遗传学的一个重要研究工具，目前在众多的模式生物分子生物中得到广泛应用，其中celⅰ酶是tilling技术的核心。本实验通过硫酸铵沉淀、亲合层析、阴阳离子交换柱层析等常规的蛋白质纯化过程，从芹菜中粗纯化了具有较高活性的稳定的celⅰ酶。并以杂合双链dna为底物，对不同纯化程度的celⅰ酶以及在不同温度、处理时间、有无taqdna多聚合酶的条件下进行了celⅰ酶的错配切割活性分析。结果发现，所获得的celⅰ酶得到了一定的纯化；celⅰ酶的反应最适温度范围为40℃～50℃；长时间酶切特异性好；在含有taq酶的酶切体系中，celⅰ酶错配切割效果更佳，这与已报道的实验结果基本一致。与其他单位提供的celⅰ酶活性相比，本实验分离纯化的celⅰ酶活性值略高。通过对celⅰ酶的提取及活性分析，为tilling技术大规模和低成本的应用于家蚕功能基因组研究提供了保障。