dig和碱性磷酸酶标记cdna探针检测番木瓜prsv的比较

？利用地高辛(dig)标记和碱性磷酸酶直接标记的cdna探针核酸分子杂交及rt－pcr方法对番木瓜环斑病毒(prsv)进行了检测。根据genebank发表的prsv中国sm株系的外壳蛋白基因序列，设计特异引物，以美中红（caricapapayal.cv.meizhonghong）带病样品的rna为模板进行rt-pcr扩增反应,将其目的cdna片段克隆到pgem-teasy质粒载体上，并测序。以重组质粒作模板，用pcr－dig标记方法制备cdna探针，另一种非放射性探针是经凝胶电泳分离、纯化cdna片段，用碱性磷酸酶直接进行标记。结果表明，(1)美中红no.2序列与中国优势株系sm的同源性为94.7%；(2)dig标记的三种cdna探针（861bp，455bp和215bp）对样品的总rna检测结果是一致的,且861bp的探针杂交斑点最为清晰，上述核酸杂交结果与rt－pcr检测结果相符,核酸分子杂交检测的灵敏度和特异性能满足常规检测的需要；(3)碱性磷酸酶直接标记861bp的cdna探针可进行prsv的斑点杂交检测，而455bp的cdna片段用碱性磷酸酶直接标记时，不能获得有效的杂交结果；(4)本试验还用dig标记探针对叶脉进行了印迹杂交检测,结果与rt－pcr检测结果相符。