具生物学活性的重组鸡leptin的制备

？将鸡leptin成熟肽的cdna片段插入表达载体prseta的nheⅰ和hindⅲ两位点之间，构建重组表达质粒plep-scau2并转化大肠杆菌(escherichiacoli)菌株bl21（de3）,将重组菌在含氨苄青霉素100μg/ml的lb培养基中培养至od600大于0.6之后，经iptg0.05mol/l诱导表达出分子量约为17.5kd的含6×his标记的重组鸡leptin，诱导4h后表达量达最高，占总菌体蛋白的25％左右,且以包涵体形式存在。该重组鸡leptin经50％ni-nta树脂纯化和透析复性折叠后分离出可溶性部分。对35日龄的矮脚黄鸡腹腔注射该可溶性重组鸡leptin（2mg/kg体重）；注射后60min内的采食量与对照组差异不显著（p>0.05），但在注射后80~120min都显著低于对照组（p<0.05）。leptin处理公鸡的采食量在注射2h后逐渐上升并在5.5h时与对照组公鸡相同。但leptin处理母鸡的采食量持续受到抑制，在注射后5.5h时仍然显著低于对照组母鸡（p<0.01）。表明所表达的重组鸡leptin能显著抑制鸡的采食量（母鸡比公鸡效果更为明显），证明所制备的重组鸡leptin融合蛋白具有生物学活性。