实时荧光pcr检测ⅱ型猪链球菌方法的建立

？建立了一种检测ⅱ型猪链球菌(streptococcussuisserotype2)的实时荧光pcr(real-timefluorescencepolymerasechainreaction)方法。用primerexpress2.0和oligo6.0设计针对ⅱ型猪链球菌荚膜抗原基因簇中cps2i基因的引物和taqman荧光探针。通过常规pcr方法扩增得到81bpdna片段，克隆到pmd18-t载体，测序表明得到的序列为目的基因片段。在lightcycler荧光pcr仪上对ⅱ型猪链球菌的扩增曲线表明，该实时荧光pcr具有良好的特异性，可成功地扩增ⅱ型猪链球菌，而参考猪链球菌(s.suis)、大肠杆菌(escherichiacoli)、沙门氏菌(salmonella)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureu)、志贺氏菌(shigella)、单增李斯特氏菌(listeriamonocytoge)和空白对照都是阴性；该检测方法可达到检测10个细菌的灵敏度，反应过程仅需30min完成；在两个不同时间检测同一浓度的菌液，每次做20个重复，2次检测所得的ct(threshold，阈循环)值之间无统计学差异(p>0.05)，方法稳定性好。该实时荧光pcr检测ⅱ型猪链球菌的方法可用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测。