无抗性标记的人白血病抑制因子打靶载体的构建及表达

？为了构建无抗性标记的人白血病抑制因子基因(hlif)打靶载体，并验证其在乳腺上皮细胞中的稳定表达。本试验利用条件重组元件loxp序列、山羊β-酪蛋白5′和3′同源臂、正负向筛选标记基因和人白血病抑制因子基因（hlif）构建hlif打靶载体。脂质体法转染山羊乳腺上皮细胞，进行g418和ganc筛选获得同源重组的阳性克隆，并通过pcr、实时定量pcr和westernblotting检测阳性克隆中hlif基因的表达情况。酶切和测序分析结果显示，本试验成功构建了hlif打靶载体ploxp-nt53l。阳性克隆经pcr、实时定量pcr和westernblotting均检测到了目的条带。表明打靶载体ploxp-nt53l已经成功整合至山羊β-酪蛋白基因座中，并能在山羊乳腺上皮细胞中特异性表达hlif蛋白。为无抗性标记的转hlif基因奶山羊生产奠定了基础。