转基因水稻bt汕优63的整合结构和品系特异性定量pcr方法

？为更好地监测转基因抗虫水稻(oryzasatival.)bt汕优63品系的存在，满足转基因标识管理的要求，同时也为了解决阳性植物基因组dna不容易获得的问题，本研究采用热不对称交互pcr(tail-pcr)、genomewalking和长链pcr(ld-pcr)方法测定了基因枪转化的转cry1ab/cry1ac融合基因水稻品系bt汕优63的外源插入dna全序列，构建了含有bt汕优633'旁侧和水稻内标基因gos9序列的标准质粒分子pmdbt63作为标准物质，建立了bt汕优63实时荧光定量pcr方法。外源插入dna全长9818bp，位于水稻基因组10号染色体(ap008214)第5348630位，由8个来源于两个转化质粒的dna片段组成，其中两个cry1ab/cry1ac表达框以正向串连的方式插入。gos9和3'旁侧两个定量标准曲线的相关系数(r2)分别为0.9997和0.9992，扩增效率(e)分别为98.05%和99.46%。每反应100ng模板dna的检测限(lod)为10拷贝，定量限(loq)为100拷贝。此外，对已知5%和1%转基因含量的混合样品dna进行定量检测，结果的平均值分别为4.98%和1.07%。结果表明标准质粒pmdbt63作为标准物质建立的定量方法可用于bt汕优63的定量检测。