转基因玉米pnk603质粒分子的构建与应用

？随着转基因植物和相关产品的迅速发展，转基因检测相关标准物质的需求越趋紧迫，本文针对转基因玉米(zeamays)nk603进行了质粒分子标准物质的构建和适应性研究。通过从转基因玉米nk603阳性材料中定性扩增转化体特异性片段(nk603-108bp)和玉米的内标基因片段(zssiib-151bp)，将得到的pcr产物酶切连接后构建到t载体上，经过酶切、pcr扩增和测序三重验证，得到了pnk603质粒分子。选用不同转基因作物的转化体特异性引物和内标准基因引物对构建的pnk603质粒分子的特异性进行检测，pcr结果显示除了特异性目的条带外，并未发现非特异性扩增。同时采用pnk603质粒分子和转基因玉米阳性基因组dna作定量标准对已知含量的3个水平的转基因基体物质进行转基因含量测定，实时荧光定量pcr结果发现，两种标准所得到测定的数据没有达到统计学差异显著。t检验表明，pcr扩增效率、两种标准所产生的内源或外源基因的标准曲线的斜率和截距没有显著性差异。这些结果表明，pnk603质粒分子可以作为转基因玉米nk603转化体特异性的定性和定量检测用标准物质。