传染性胃肠炎病毒(tgev)双启动子真核表达载体pvaxd-n/s的构建与鉴定

？猪传染性胃肠炎(tge)是由猪传染性胃肠炎病毒(tgev)引起的高度接触性传染病。tgev的s、n基因具有重要的免疫学功能，构建s、n双基因疫苗将能提供更好的免疫效果。本研究用rt-pcr扩增s基因抗原区(2.1kb，含a、b、c和d完整的抗原位点)和n基因编码区(1.2kb)，分别定向插入双启动子真核表达载体pvaxd的多克隆位点(mcs)，构建了单价质粒pvaxd-n和pvaxd-s，然后将n基因插入pvaxd-s中，构建了双启动子真核表达质粒pvaxd-n/s。将pvaxd-n/s与对照组(pvaxd-n、pvaxd-s和pvaxd)转染cos-7细胞进行表达鉴定，用rt-pcr可从pvaxd-n/s转染细胞中扩增出s、n两个目的基因，ifa鉴定结果显示，pvaxd-n/s可同时表达s、n两种目的蛋白。初步的小鼠(musmusculus)免疫试验结果显示，pvaxd-n/s免疫小鼠后第14天即可检测到抗tgev的igg抗体，第35天抗体达最高峰，pvaxd-n/s诱导的抗体水平显著高于单基因质粒组pvaxd-n和pvaxd-s的抗体水平(p>0.5)，与混合质粒(pvaxd-n+pvaxd-s)诱导的抗体水平相当。本研究结果表明，构建的双启动子表达载体pvaxd-n/s具有s、n基因的双重免疫功能，为tgev新型双基因疫苗研究提供了基础材料。