猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)gp3-gp5-m融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达

？猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)是一种严重危害养猪业发展的传染病，为了prrsvgp3-gp5(n-糖基化蛋白)-m(膜蛋白)融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达及其免疫原性，本研究利用脂质体法将构建好的真核重组表达质粒pcdna3.1-orf3-orf5-orf6转染猪肾细胞(pk-15细胞)，经g418(600μg/ml)筛选(72h)获得稳定表达prrsvgp3-gp5-m融合蛋白的稳定细胞株。以rt-pcr分析目的基因转录；间接免疫荧光检测融合蛋白表达；westernblot和小鼠(musmusculus)免疫试验检测融合蛋白免疫原性。结果表明，rt-pcr检测到3种目的基因的转录；间接免疫荧光检测到融合蛋白得以表达，westernblot检测到融合蛋白可与阳性猪血清发生特异性反应。小鼠免疫试验二免后s/p=样本/阳性对照的比率，达到1.80(s/p＞0.4为阳性)，并且至少可以持续1个月。本研究成功实现了prrsvgp3-gp5-m融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达，证实prrsvgp3-gp5-m融合蛋白具有良好的免疫原性，为prrsv多基因核酸疫苗研制提供了基础资料。