f18菌毛粘附素f基因(fedf)在大肠杆菌中的表达及对小鼠的免疫保护效果

？引起早期仔猪断奶腹泻(pwed)的主要致病菌是产肠毒素型大肠杆菌(etec)，免疫预防是防治腹泻最主要的手段。本研究采用通过大肠杆菌(escherichiacoli)表达的重组f18菌毛粘附素f(fedf)作为抗原，在小鼠(musmusculus)中探索以此为靶标免疫防治仔猪腹泻的可能性。根据相应f18菌毛粘附素基因(fedf)设计了一对添加ecorⅰ和salⅰ酶切位点的引物，以e.colif18为模板扩增出全长908bp含20个信号肽序列的fedf片段，并与原核表达载体pet-30a(+)连接,导入大肠杆菌bl21，得到基因工程菌e.coli[pet-fedf]，后经iptg诱导及菌液蛋白电泳分析，结果表明，大小约为32.9kd的重组蛋白fedf可成功诱导表达；将重组工程菌口服免疫balb/c小鼠，可有效地诱导小鼠血清中fedf特异性igg的产生(p/n值>2.0)及小鼠肠粘膜siga显著增加了2.07倍(与空载体组pet-30比较)(p<0.05)；攻毒试验表明，口服基因工程菌e.coli[pet-fedf]可显著地有效保护小鼠免予攻毒死亡，免疫保护率可达62.5%。研究结果提示，fedf黏附蛋白基因工程菌可通过口服诱导小鼠特异的体液和粘膜免疫反应，以此保护小鼠免受产肠毒素型大肠杆菌的进攻，因而有望作为一种口服疫苗防治产肠毒素型大肠杆菌引起的仔猪腹泻