l.reuteri亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中的表达及活性检测

？以大肠杆菌(escherichiacoli)bl21为表达宿主，重组表达亚油酸异构酶(gli)。根据genbank上发表的gli基因序列，设计并合成一对引物，从l.reuteripyr8基因组中，pcr扩增出去除5’端42bp信号肽的gli基因片断，将其克隆入pmd－18－t载体中，序列测定后将gli基因亚克隆到表达载体pet30a中（pet30a-gli），将其转化大肠杆菌bl21(de3)，在1mmol/liptg30℃条件下诱导表达，大肠杆菌裂解物经sds-page分析，出现了一新分子量约67kd的蛋白带，与预期目的蛋白分子量相符。生物学活性鉴定表明：经稀释、透析复性，获得的重组gli在反应缓冲液可以将亚油酸（la）转化为共轭亚油酸（cla），30℃ph7.3的na2hpo4-柠檬酸缓冲液，酶活最高为1377u。为进一步体外研究gli的生物学活性、酶作用机制奠定了基础。