里氏木霉rut-c30内切β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的分泌表达

？：以里氏木霉（trichodermareesei）rna为模板，采用rt-pcr扩增的方法获得不带自身信号肽man1基因的cdna片段。构建了重组表达载体ppic9k-man1，重组质粒sacⅰ线性化后用peg（聚乙二醇）法导入毕赤酵母pichiapastoris菌株gs115中，通过pcr和表型鉴定表明man1基因已经整合到毕赤酵母染色体上。经大量筛选，获得高效分泌表达甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株rman23。将此菌株在5l发酵罐中进行高密度发酵，测定酶活最高达470iu/ml，同时对重组甘露聚糖酶的性质进行了初步研究。