检测兽用疫苗中霉形体污染的pcr-elisa技术的建立及应用

？本试验建立检测兽用疫苗中霉形体污染的pcr-elisa方法，探索其最佳试验条件及优化组合，并与pcr检测法作对比，评价其应用价值。试验依据genbank中登录的鸡源霉形体和猪源霉形体16srrna基因序列，运用dnastar软件和primer5.0软件设计pcr特异性引物和探针，其中引物用地高辛标记，探针用生物素标记。然后以培养的霉形体中提取的dna为模板，依据pcr-elisa技术原理设计试验，建立并优化pcr-elisa反应条件。最后用建立的pcr-elisa扩增体系和条件对从市场上随机购买的30批鸡新城疫ⅰ系活疫苗样品、30批鸡新城疫lasota系活疫苗样品和30批猪瘟活疫苗样品进行检测。检测结果表明：应用建立的pcr-elisa反应体系和条件可以从疫苗样品中检测到霉形体，检测率为35.6%，比pcr法的检测率高11.2%。该方法灵敏度高，特异性强，在疫苗的霉形体污染检测中具有推广应用价值。