tomv番茄坏死株系农杆菌侵染性克隆构建及其表达

？番茄花叶病毒(tomatomosaicvirus,tomv)是烟草花叶病毒属(tobamovirus)的典型成员，该病毒侵染严重影响农作物的产量和质量。tomv-n5株系能引起番茄(lycopersiconesculentum)主栽品种(合作903)系统性坏死，建立该株系的侵染性克隆体系是研究其致病机理的必要条件。本研究将tomv-n5株系的基因组克隆至含35s启动子瞬时表达载体pcb301中，农杆菌(agrobacteriumtumefaciens)浸润接种本氏烟(nicotianabenthamiana)和番茄结果表明，农杆菌侵染性克隆pcb301-tomv-n5引起本氏烟和番茄系统性坏死症状，与其病毒粒子摩擦接种所引起的症状相一致。以绿色荧光蛋白基因(greenfluorescentprotein,gfp)代替tomv-n5的外壳蛋白基因(coatprotein,cp)获得表达载体pcb301-tomv-n5cp45gfp，病毒接种结果表明，tomv-n5能高效表达gfp，在病毒浸润接种浓度(od600)为0.002时，gfp也能够有效表达。pcb301-tomv-n5cp45gfp缺失了cp基因使得病毒不能系统性侵染，将烟草花叶病毒(tobaccomosaicvirus,tmv)u5株系包含cp大小为647nt(nt5498~6145)片段克隆到pcb301-tomv-n5cp45gfp中，获得pcb301-tomv-n5cp45gfp-cpu5，浸润接种本氏烟结果表明，病毒能长距离移动，在寄主非接种部位表达gfp；浸润及摩擦接种番茄结果表明，只能在显微镜下观察到微弱gfp，且局限于接种部位。本研究成功获得了tomv-n5株系的农杆菌侵染性克隆及其表达载体，为研究该病毒侵染的分子机理提供了基础资料。