奶山羊超长链脂肪酸延伸酶6基因(elovl6)的克隆及其对4个脂肪酸代谢基因表达水平的影响

？超长链脂肪酸延伸酶6(elongaseofverylongchainfattyacids6，elovl6)是长链脂肪酸延长反应的限速酶。本研究旨在通过对奶山羊(caprahircus)elovl6基因的克隆、组织表达分析以及腺病毒(adenovirus)介导的超表达技术，研究该基因超表达后对乳腺上皮细胞中脂肪酸代谢相关基因的影响。利用rt-pcr技术克隆了奶山羊elovl6基因的cds区；利用实时荧光定量pcr(qrt-pcr)检测该基因在泌乳期奶山羊10个组织中的相对表达量；构建该基因的重组腺病毒超表达载体，包装出高滴度的腺病毒并感染奶山羊原代乳腺上皮细胞，qrt-pcr检测elovl6超表达效果及其对脂肪酸代谢相关基因的影响。结果表明，elovl6基因cds区序列长度为795bp(genbank登录号:kf667508)，共编码264个氨基酸。同源分析发现，奶山羊elovl6基因cds区核酸序列与牛(bostaurus)、大鼠(rattusnorvegicus)和人(homosapiens)的同源性分别为97%、90%和93%，氨基酸序列同源性分别为99%、92%、95%。利用tmpred对elovl6蛋白跨膜结构预测分析，发现该蛋白有5个跨膜区，保守的组氨酸模体(hxxhh)位于elovl6蛋白的第二与第三跨膜螺旋间。elovl6蛋白质疏水性预测显示，该蛋白总体具有较强的疏水性。组织表达分析显示，elovl6基因在脂肪组织中表达量最高(p<0.01)，小肠次之(p<0.01)，心脏中表达量最低。超表达elovl6基因的重组腺病毒的滴度为108u/ml，病毒液感染原代乳腺上皮细胞48h后，elovl6基因的表达量上升约200倍；脂肪酸代谢相关基因检测分析发现，固醇调节元件结合蛋白-1基因(srebp-1)的表达量显著下降(p<0.05)，脂肪分化相关蛋白基因(adrp)的表达量显著升高(p<0.05)，过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因(pparγ)及脂肪酸转位酶基因(cd36)的表达量无明显变化。研究结果表明，elovl6基因可以影响奶山羊乳腺上皮细胞脂肪酸代谢相关基因的表达，对乳腺脂肪酸代谢具有一定的调控作用。本研究为elovl6基因在奶山羊乳腺脂肪酸代谢调控中的功能研究提供研究依据。