体细胞核移植技术生产转人溶菌酶基因(hlyz)牛胚胎的研究

？本研究主要探讨经基因修饰和筛选后转基因供体细胞的挑选及处理对牛转人溶菌酶基因克隆胚胎早期发育的影响。用含人溶菌酶基因(humanlysozyme，hlyz)乳腺特异表达载体pebh重组质粒转染高产荷斯坦牛成纤维细胞，经g418筛选后的转基因阳性细胞作为核供体细胞成功构建了转hlyz基因克隆胚胎。结果发现，基因转染及筛选过程对转基因重构胚的发育有不利的影响，囊胚发育率显著降低；以注核针内径为参照，挑选直径为15~20μm的转基因阳性细胞作为供体细胞，重构胚的融合率和囊胚率较其它组差异显著(分别为80.4%和33.8%，p<0.05)；生长旺盛期的细胞构建的转基因克隆胚的卵裂率及囊胚发育率显著高于经血清饥饿和生长接触抑制处理组(p<0.05)；所有的转基因克隆胚在体外发育的各个发育时期都能观察到绿色荧光蛋白的表达，但表达的强弱在不同个体及相同个体不同发育时期之间存在差异。随机挑选10枚囊胚以pcr法进行鉴定，结果全部为阳性转基因胚胎。研究结果表明，利用体细胞核移植方法可以获得转hlyz基因的克隆胚胎，重构胚可成功的发育到囊胚阶段；挑选生长旺盛期的直径为15~20μm的转基因阳性细胞作为供体细胞可显著提高转基因克隆胚的融合率和囊胚率。