番茄metacaspase基因(lem)的克隆及其在大肠杆菌rosetta中的高效表达

？为获得可溶性的番茄metacaspase蛋白，后续研究metacaspase蛋白的酶学特性以及功能，利用rt-pcr方法克隆了番茄(lycopersiconesculentum)中metacaspase(lem)全长cdna，并成功地构建了lem基因的原核表达载体重组质粒pet28a-lem，转入大肠杆菌(escherichiacoli)bl21(de3)plyss和rosetta中进行诱导表达，并对诱导表达条件进行了优化。sds-page结果显示，在37℃条件下,1mmol/liptg诱导表达量最高，在bl21(de3)plyss菌株中重组蛋白主要以包涵体形式存在，而相同条件下在rosetta菌株中多为可溶性表达。同时酶活测定显示，rosetta上清中lem的活性为33rfu/min,显著高于bl21(de3)plyss7rfu/min。本实验表明，不同菌株对metacaspase的可溶性表达有很大影响。