不同转化方法获得的转基因棉花外源基因拷贝数分析

？转基因植物中外源基因拷贝数是影响其自身表达水平与遗传稳定性的重要因素。本研究旨在比较农杆菌介导法、基因枪轰击法和花粉管通道法等3种常用方法转化同一植物表达载体的转基因棉花(gossypiumhirsutum)中外源基因拷贝数的差异。本文主要采用实时定量pcr技术及相应的pfaffi分析法检测转基因棉花单株拷贝数，并与southern杂交做了相互验证。实时定量pcr研究结果显示，农杆菌介导法、基因枪轰击和花粉管通道注射法获得的t0代转化体中，外源基因拷贝数为1~2的单株占群体总数的百分比分别为26.2%、60%和42.8%。外源基因拷贝数为3~5的单株比例分别为47.5%、40%和57.1%。另外，农杆菌介导获得的转基因群体中有高达27.3%的单株整合有5拷贝以上的外源基因，而基因枪轰击和花粉管通道注射法获得的转基因群体中没有发现5拷贝以上的转基因单株。研究结果表明，基因枪轰击和花粉管通道注射法均能获得较高比例低拷贝（1~3拷贝)的转化体。本研究结果对棉花转基因育种中转化方法的选择有一定的理论指导意义。