嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶基因(kerf)的克隆及其在大肠杆菌中的表达

？为研究嗜麦芽窄食单胞菌(stenotrophomonasmaltophilia)降解羽毛的机理，本研究克隆了嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶基因(kerf)，并获得其全长基因序列1981bp，含有1个1743bp的开放阅读框，编码580个氨基酸(genebank登陆号hm590650)，将角蛋白酶kerf基因连入表达载体pet28a(+)中，构建重组表达质粒pet28-kerf并转化大肠杆菌(escherichiacoli)bl21(de3)，获得重组工程菌。采用金属ni+螯和层析柱对所表达的角蛋白酶进行纯化，获得分子量为50kd的重组角蛋白酶kerf。该酶的最适温度为50℃，最适ph值为9.0。金属离子mn2+、co2+、mg2+、ni+、ba2+、zn2+、ca2+、fe3+及蛋白酶抑制剂二苯基甲基磺酰氟(pfsm)能强烈抑制该酶活性，乙二胺四乙酸(edta)对该酶活具有促进作用。本研究结果表明，嗜麦芽窄单胞菌角蛋白酶基因在大肠杆菌中获得成功表达，重组角蛋白酶kerf为碱性丝氨酸蛋白酶。