烟草丛顶病毒(tbtv)orf3和orf4的原核表达、抗血清制备及应用

？为制备烟草丛顶病毒(tbtv)orf3和orf4多克隆抗体，采用rt-pcr方法克隆了tbtv保山龙陵分离物(tbtv-bslli)的orf3和orf4，亚克隆至pmd18-t载体中，经测序正确后，将该基因插入原核表达载体pet28a(+)中，通过热击转化大肠杆菌(escherichiacoli)bl21(plyss)，以iptg诱导6×his融合蛋白的表达，并经ni2+亲和柱层析纯化，成功地克隆了tbtv的orf3和orf4，建立了其原核表达和表达产物的纯化体系,获得了高纯度的orf3、orf4蛋白。用纯化的蛋白免疫大白兔，获得高效价的特异性抗血清。das-elisa检测结果表明，制备的抗血清可用于田间烟草(nicotianatabacuml.)样品及传播介体的检测。本研究为用血清学方法检测该病毒提供了基础条件。