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农业生物技术学报 2011
大口黑鲈溃疡综合征病毒甲基转移酶基因序列分析与原核表达, PP. 258-262 Keywords: 大口黑鲈(micropterussalmoides),大口黑鲈溃疡综合症病毒,虹彩病毒,dna甲基转移酶,原核表达 Abstract: ?为了对新分离到的大口黑鲈溃疡综合征病毒(largemouthbassulcerativesyndromevirus,lbusv)的特征作进一步了解,促进lbusv、dfv(doctorfishvirus)和lmbv(largemouthbassvirus)这类病毒的深入研究,本文克隆了lbusvdna甲基转移酶(dnamtase)基因约200bp的保守核心片段,用基因组步移的方法扩增到了核心片段的侧翼序列,获得了dnamtase基因的编码区全长序列。序列分析表明,dnamtase基因开放阅读框共663bp(genbank登录号:gu256634),编码220个氨基酸。结构域分析显示,lbusvdnamtase蛋白具有4个保守的dnamtase结构域ⅰ、ⅳ、ⅵ和ⅷ,以及辅酶结合位点、底物结合位点和dna结合位点等dnamtase活性位点,其中的脯氨酸-脯氨酸-半胱氨酸三肽是潜在的催化位点。另外,本文还根据dnamtase基因开放阅读框设计引物,pcr扩增和酶切后插入到pbv220载体中,经转化大肠杆菌(escherichiacoli)dh5α,温度诱导和sds-page检测,重组菌在分子量25kd处有一条特异蛋白带,重组蛋白约占菌体总蛋白的30%。研究结果推测,该基因编码的蛋白具有dna甲基化的功能,该病毒的分类地位为虹彩病毒科蛙病毒属。
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