tail-pcr和tn5转座子质粒拯救法快速分离水稻条斑病菌致病相关基因

？构建植物病原菌突变体库是进行新基因发掘和功能基因组学研究的有效途径之一。为了快速准确地确定tn5的插入位点和相应的功能基因，本研究采用tail-pcr和tn5转座子质粒拯救两种技术对本实验室在筛选tn5转座子插入水稻条斑病菌的突变体库过程中获得的8个在水稻上毒性减弱的突变体进行了鉴别。结果显示，tail-pcr和tn5质粒拯救相互结合使用，可有效鉴别tn5的插入位点和相应的功能基因。tail-pcr明确的5株突变体是tn5分别插入在gspf、camp-regulatoryprotein、integralmembraneproteasesubunit、s-adenosylmethioninedecarboxylaseproenzyme和gpsj基因上从而导致水稻条斑病菌的毒性发生了改变；tn5质粒拯救法明确的3株突变体是tn5分别插入在pathogencityprotein、conservedhypotheticalprotein和flagellum-specificatpsynthase基因上。同源分析发现，8株突变体tn5插入的基因与已基因组测序的bls256菌株中的基因同源性达100%。这表明，tail-pcr和tn5质粒拯救技术可有效应用于植物病原菌tn5突变体库的鉴别和目标基因的分离。