利用ecotilling简化技术进行水稻基因型鉴定及单核苷酸多态性(snp)检测

？ecotilling(ecotypetargetinginducedlocallesionsingenomes)是一种高通量检测和分析自然群体中单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,snp)变异的研究方法。由于该技术需要高级、精密的仪器设备和昂贵的荧光标记引物来检测cel(celery)ⅰ的酶切产物，极大地限制了该技术的应用。本研究对传统ecotilling技术做了适当改进，简化了celⅰ酶的抽提步骤，采用自然冷却方法制备异源双链产物，普通银染检测celⅰ酶切产物，酶活检测结果显示celⅰ粗提液对错配产物切割效果良好。利用ecotilling简化技术对18份水稻(oryzasatival.)品系wx基因第1内含子5'端的g/t基因型进行了成功鉴定。此外，对18份水稻材料中一417bp长的wx基因片段实现了celⅰ酶切条带分型，经测序验证，酶切带型差异能够准确反映材料间snp的变异。本研究结果表明，应用ecotilling简化技术可有效进行水稻基因型鉴定及snp检测，是开展水稻功能基因组研究的有力工具。